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一、 原理
業(yè)已證明，人及多種動(dòng)物紅細(xì)胞與白細(xì)胞一樣，也具有重要的免疫功能。其基礎(chǔ)是紅細(xì)胞表面具有C3b受體（C3bR）。紅細(xì)胞可通過其表面的C3bR，發(fā)揮清除免疫復(fù)合物（IC）、促進(jìn)吞噬、提呈抗原及激活補(bǔ)體等多種作用。因此，建立的檢測(cè)紅細(xì)胞免疫功能的各種方法，也多以紅細(xì)胞表面的C3bR為基礎(chǔ)設(shè)計(jì)的。現(xiàn)已建立的方法主要有標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞免疫粘附試驗(yàn)、紅細(xì)胞SPA混合花環(huán)試驗(yàn)、單克隆抗體Coombs試驗(yàn)、抗C3bR單克隆抗體法、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、放射配體結(jié)合法、紅細(xì)胞促吞噬作用測(cè)定法等。
本實(shí)驗(yàn)僅介紹簡(jiǎn)便易行的紅細(xì)胞C3bR酵母花環(huán)試驗(yàn)及紅細(xì)胞IC酵母花環(huán)試驗(yàn)。前者用于測(cè)定紅細(xì)胞C3bR，其原理為用小鼠等血清（補(bǔ)體）致敏后的酵母，其細(xì)胞表面吸附有C3b，可與紅細(xì)胞表面的C3bR結(jié)合，從而將酵母細(xì)胞吸附在紅細(xì)胞周圍形成花環(huán)。后者用于檢測(cè)紅細(xì)胞表面的免疫復(fù)合物，其原理為紅細(xì)胞表面的C3bR可與體內(nèi)形成的抗原—抗體—補(bǔ)體復(fù)合物中的補(bǔ)體成分結(jié)合，而將免疫復(fù)合物吸附在其表面，而酵母細(xì)胞也可與免疫復(fù)合物中的補(bǔ)體成分結(jié)合，從而被吸附于紅細(xì)胞表面形成花環(huán)。通過檢測(cè)該兩種花環(huán)率的高低，即可測(cè)知紅細(xì)胞免疫功能狀態(tài)。

二、 材料與方法
（一） 材料主要有離心機(jī)、恒溫水浴箱、顯微鏡、計(jì)數(shù)器、小離心管、血細(xì)胞計(jì)數(shù)板、酵母試劑、Hanks液、豚鼠血清、動(dòng)物抗凝血、姬氏染色液等。
（二） 方法
1紅細(xì)胞C3bR酵母花環(huán)試驗(yàn)
（1） C3b致敏酵母懸液制備：將酵母試劑用Hanks液（含鈣、鎂，pH值72，下同）洗1次（1000 r/min 10min），配成含1×108酵母細(xì)胞/ml的懸液，然后加等量新鮮豚鼠血清，混勻，37℃水浴20min，然后再以Hanks液洗2次，恢復(fù)原濃度，即為C3b致敏酵母細(xì)胞懸液。酵母試劑用Hanks液洗滌后，配成1×108/ml濃度，即為非致敏酵母懸液。
（2） 紅細(xì)胞懸液制備：將人或鼠、兔、牛、雞等被檢動(dòng)物的肝素抗凝血，用Hanks液洗3次
（每次以2000 r/min離心5min），zui后將紅細(xì)胞用Hanks液稀釋成125×107細(xì)胞/ml的懸液。
（3） 檢測(cè)方法：取C3b致敏酵母懸液和紅細(xì)胞懸液各50μl，混勻，于37℃水浴40min后取出，輕輕搖起，加025%戊二醛溶液20μl固定5min，用適量Hanks液稀釋，涂片，干燥，甲醇固定，姬姆薩氏染液染色，高倍鏡檢查，以1個(gè)紅細(xì)胞粘附2個(gè)或2個(gè)以上酵母細(xì)胞為1個(gè)花環(huán)，計(jì)數(shù)200個(gè)紅細(xì)胞，求出花環(huán)率。
2紅細(xì)胞IC酵母花環(huán)試驗(yàn)除酵母細(xì)胞不致敏外，其余同紅細(xì)胞C3bR花環(huán)試驗(yàn)。

三、 結(jié)果
正常情況下，兩個(gè)試驗(yàn)均會(huì)看到在紅細(xì)胞周圍粘附幾個(gè)酵母細(xì)胞形成的花環(huán)，且紅細(xì)胞C3bR花環(huán)率大大高于紅細(xì)胞IC酵母花環(huán)率。如正常情況下，人的兩種花環(huán)率分別為25%～35%和3～8%，雞的兩種花環(huán)率分別為9%～19%和3%～6%。但發(fā)生疾病時(shí)（如各種傳染病及腫瘤等），兩種花環(huán)率會(huì)發(fā)生變化。

四、 注意事項(xiàng)
1 不同動(dòng)物來源的補(bǔ)體對(duì)本實(shí)驗(yàn)結(jié)果影響很大，因此檢測(cè)不同種屬來源的紅細(xì)胞，應(yīng)采用不同動(dòng)物的補(bǔ)體。如檢測(cè)人的紅細(xì)胞，應(yīng)用豚鼠血清作補(bǔ)體，檢測(cè)雞的紅細(xì)胞應(yīng)以家兔血清作補(bǔ)體，檢測(cè)牛的紅細(xì)胞應(yīng)以小鼠血清作補(bǔ)體。補(bǔ)體來源不對(duì)，很難形成花環(huán)。
2 補(bǔ)體血清及被檢紅細(xì)胞均應(yīng)現(xiàn)采現(xiàn)用，不能馬上使用時(shí)，可暫存于4℃冰箱內(nèi)，但一般不超過6h。
3 試驗(yàn)管從水浴中取出搖勻時(shí)，要以腕力輕輕搖勻，不可振蕩。涂片時(shí)，應(yīng)用毛細(xì)管吸一小滴于玻片上，并用平放的毛細(xì)管輕輕涂開即可，不可來回反復(fù)涂抹。
4 所用Hanks液pH值要調(diào)整準(zhǔn)確，否則不易形成花環(huán)。