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免費代測大鼠多巴胺ELISA 檢測試劑盒上海,南京
更新時間:2012-07-02   點擊次數:1307次

大鼠多巴胺ELISA 檢測試劑盒上海,南京

 本試劑僅供研究使用      標本:血清或血漿

試驗原理:
 Dopamine試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗(ELISA).已知Dopamine濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將Dopamine和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌,去除未結合的酶結合物,然后加入底物A、B,和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中Dopamine的濃度呈比例關系。
 
試劑盒內容及其配制
試劑盒成份(2-8℃保存) 96孔配置 48孔配置 配制
96/48人份酶標板 1塊板(96T) 半塊板(48T) 即用型
塑料膜板蓋 1塊 半塊 即用型
標準品:1600ng/L 1瓶(0.6ml) 1瓶(0.3ml) 按說明書進行稀稀
空白對照 1瓶(1.0ml) 1瓶(0.5ml) 即用型
標準品稀釋緩沖液 1瓶(5ml) 1瓶(2.5ml) 即用型
生物素標記的抗Dopamine抗體 1瓶(6ml) 1瓶(3.0ml) 即用型
親和鏈酶素-HRP 1瓶(10ml) 1瓶(5.0ml) 即用型
洗滌緩沖液 1瓶(20ml) 1瓶(10ml) 按說明書進行稀釋
底物A 1瓶(6.0ml) 1瓶(3.0ml) 即用型
底物B 1瓶(6.0ml) 1瓶(3.0ml) 即用型
終止液 1瓶(6.0ml) 1瓶(3.0ml) 即用型
標本稀釋液 1瓶(12ml) 1瓶(6.0ml) 即用型

自備材料
蒸餾水。
加樣器:5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
振蕩器及磁力攪拌器等。

大鼠多巴胺ELISA 檢測試劑盒上海,南京

安全性
避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。
實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

操作注意事項
試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。
實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。
不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。
使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
底物A應揮發,避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

大鼠多巴胺ELISA 檢測試劑盒上海,南京

樣品收集、處理及保存方法
血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液
保存------如果樣品不立即使用,應將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

試劑的準備
標準品:標準品的系列稀釋應在實驗時準備,不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行:
1600 ng/L (6號標準品) 原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。
800 ng/L (5號標準品) 100ul的原倍標準品加入100ul的標準品稀釋液
400 ng/L (4號標準品) 100ul的5號標準品加入100ul的標準品稀釋液
200 ng/L (3號標準品) 100ul的4號標準品加入100ul的標準品稀釋液
100 ng/L (2號標準品) 100ul的3號標準品加入100ul的標準品稀釋液
50 ng/L (1號標準品) 100ul的2號標準品加入100ul的標準品稀釋液
0 ng/L (空白對照) 原始濃度不用稀釋直接加入50ul。

洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾水50倍稀釋。


操作步驟
使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產生加樣上的誤差。
根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定,能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1:1稀釋后加入50ul于反應孔內。
加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。
甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。
每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。
每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。
取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結果。
在450nm波長處測定各孔的OD值。

6號標準品以上的結果為非線性的,根據此標準曲線無法得到的結果。

大鼠多巴胺ELISA 檢測試劑盒上海,南京

試劑盒性能
 1. 靈敏度:zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990。
2. 特異性:不與其它細胞因子反應。
3. 重復性:板內、板間變異系數均小于10%。

結 果 判 斷 與 分 析
1、儀器值:于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值

2、以吸光度OD值為縱坐標(Y),相應的Dopamine標準品濃度為橫坐標(X),做得相應的曲線,樣品的Dopamine含量可根據其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。

3、檢測值范圍:0-1600ng/L

4、敏感度: 1.0 ng/LAzure C 天青C [531-57-7] 25g
Barbituric acid 巴比妥酸 / 25g
Alginic acid 海藻酸 [9005-32-7] 250g
Alloxan, monohydrate 阿脲 [2244-11-3] 5g
Climbazol 甘寶素 [38083-17-9] 500g
Dexamethasone 地塞米松 [50-02-2] 5g
Direct red 80 天狼猩紅 [2610-10-8] 25g
DTAC 十二烷基 -*基氯化銨 [112-00-5] 50g
Erythrosin B, sodium salt 藻紅B [568-63-8] 25g
Brilliant green 燦爛綠 [633-03-4] 100g
Aniline blue,alcohol soluble 苯胺藍醇溶 [8004-91-9] 25g
Aniline blue, water soluble 苯胺藍(水溶) [28631-66-5] 25g
Ruthenium Red 釕紅 [11103-72-3] 100mg
Azure B 天青B [531-55-5] 25g
Azelaic acid 壬二酸 [123-99-9] 250g
Aflatoxin G1 黃曲霉毒素G1 [1165-39-5] 1mg
Aflatoxin G2 黃曲霉毒素G2 [7241-98-7] 1mg
Aflatoxin M1 from Aspergillus flavus 黃曲霉毒素M1 [6795-23-9] 1mg
Agarose ITM 瓊脂糖 ITM [9012-36-6] 25g
Allura red 誘惑紅 [25956-17-6] 100g
Ethyl red 乙基紅 [76058-33-8] 50g
BPDA 聯苯二酐 [2420-87-3] 100g
Recombinant Human beta-Defensin 2( rHuBD-2 ) 重組人β-防御素2 5ug
Recombinant Murine Interleukin-4( rmIL-4 ) 重組小鼠白細胞介素-4 2ug
細胞分離液1.084 200ml
優級胎牛血清 100ml
Recombinant Murine Interleukin-10( rmIL-10) 重組小鼠白細胞介素-10 2ug
Recombinant Murine Tumor Necrosis Factor-alpha( rMuTNF-α ) 重組小鼠腫瘤壞死因子α 5ug
Recombinant Mouse Leukemia inhibitory factor(rmLIF) 重組小鼠白血病抑制因子 5ug
Recombinant Murine Fibroblast Growth Factor-basic (rMubFGF ) 重組小鼠堿性成纖維細胞生長因子 10ug
Recombinant Murine Epidermal Growth Factor (rmEGF ) 重組小鼠表皮生長因子 100ug
細胞分離液1.055 200ml
細胞分離液1.061 200ml
細胞分離液1.070 200ml
Recombinant Murine VEGF120 (rMuVEGF120) 重組小鼠血管內皮生長因子120 2ug
Recombinant Murine VEGF165 (rMuVEGF165) 重組小鼠血管內皮生長因子165 2ug
Recombinant Mouse Interferon-γ (rMuIFN-γ) 重組小鼠干擾素-γ 20ug

 

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